KGF购自上海朗月生物科技有限公司，批号为121229。正常熔点和低熔点琼脂糖凝胶购自法国Biowest公司，Tris·HCl、二甲基亚砜、TritonX-100、Giemsa染液均购于美国Sigma公司。水平电泳仪为美国BIO-RAD公司产品，Nikon 90i荧光显微镜购自日本Nikon公司。¹³⁷Cs源购自加拿大Best Theratronics公司，剂量率1.02 Gy/min。

C57BL/6J雄性小鼠40只，无特定病原体级，8~10周龄，体质量20~22 g，购于中国食品药品检定研究院国家啮齿类实验动物种子中心，饲养于天津市实验动物中心。将实验动物随机分为5组，每组8只，分别为：空白对照组、照射对照组、KGF低（1 mg/kg）、中（2 mg/kg）、高（4 mg/kg）剂量组，KGF的3个给药组于照射前给药，连续3 d分别给予腹腔注射1、2、4 mg/kg的KGF，1次/d。照射对照组腹腔注射磷酸盐缓冲液。给药后，空白对照组给予假照射，其余4组均给予7.2 Gy ¹³⁷Cs γ射线全身一次性照射。

参考Banáth等^[3]的方法进行操作，步骤如下：①铺胶：照射后立即采用微量眼球取血法取5组小鼠外周血0.05 ml/只，分离淋巴细胞。将100 μl正常熔点琼脂糖凝胶均匀铺于彗星玻片上，置于4 ℃冰箱中固化，将25 μl淋巴细胞悬液与75 μl低熔点琼脂糖凝胶混匀后均匀铺于第一层凝胶上面，置于4 ℃冰箱中固化；②裂解和电泳：将胶板置于新鲜配制的碱性裂解液中，于4 ℃裂解1.5 h；用双蒸水漂洗去掉多余的盐分，置于4 ℃电泳液中解旋20 min，然后在20 V、200 mA的电泳条件下电泳20 min；③染色和观察：采用溴化乙锭染色，双蒸水漂洗，去掉多余染液，于荧光显微镜（40倍物镜）下观察彗星，用图像传感器对每份样品随机拍摄100个彗星图像。采用波兰弗罗茨瓦夫大学（Wroclaw university）提供的慧星分析软件系统对所得彗星图像进行分析。

5组小鼠全身照射1 h后，脱颈椎处死并取两侧股骨，剪去骨两端，用2 ml胎牛血清（美国Gibco公司）冲洗骨髓，直至骨髓腔发白为止。将骨髓冲洗液以200×g离心8 min，除去约0.5 ml胎牛血清外，弃多余上清，将沉淀悬浮混匀。在每个载玻片上滴1滴混匀液，推片后自然干燥，于冰乙酸:甲醇为1:3的固定液中固定10 min，晾干后于10%的Giemsa染液中染色2 min，用pH 6.8的K₂HPO₃:Na₂HPO₃为1:1的缓冲液洗涤背景。晾干后，在油镜下计数每只动物1000个骨髓嗜多染红细胞（polychromatic erythrocytes，PCE）并统计其微核发生率，计数每只动物200个骨髓细胞并统计其中PCE与正染红细胞（normochromatic erythrocytes，NCE）的比例。

应用SPSS13.0统计学软件对彗星尾部DNA百分含量、尾长、尾矩、Olive尾矩、微核率、PCE/NCE值等所有数据进行统计学处理，数据均以均数±标准差（x±s）表示，多组比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用最小显著差数法，P < 0.05为差异有统计学意义。

各实验组小鼠彗星尾部DNA百分含量、尾长、尾矩、Olive尾矩分别见图 1和表 1。结果显示，小鼠接受7.2 Gy γ射线全身一次性照射后，照射对照组各项指标与空白对照组相比均明显升高，差异有统计学意义（t=6.226、9.520、3.924和5.369，P均 < 0.01），提示造模成功。与照射对照组相比，KGF低剂量组各项指标差异均无统计学意义，中剂量组各项指标差异均有统计学意义（t=2.385、3.188、2.733和2.892，P分别为 < 0.05、 < 0.01、 < 0.01和 < 0.01），高剂量组的差异更加明显（t=3.189、6.987、3.648和3.097，P均 < 0.01）。以上结果提示KGF可促进小鼠淋巴细胞DNA损伤的修复，且修复能力与KGF的给药剂量存在一定相关性。

图  1  7.2 Gy γ射线全身一次性照射引起的各组小鼠外周血淋巴细胞DNA断裂彗星图

各实验组小鼠微核率、PCE/NCE值结果见表 2。结果显示，小鼠接受7.2 Gy γ射线全身一次性照射后，与空白对照组相比，照射对照组微核率显著升高，PCE/NCE值显著降低，差异均有统计学意义（t=5.336和4.511，P均 < 0.01），提示造模成功。与照射对照组相比，KGF低剂量组微核率显著降低（t=3.805，P < 0.01），PCE/NCE值明显升高（t=2.181，P < 0.05）；中剂量组和高剂量组微核率显著降低（t=4.391和4.935，P均 < 0.01），PCE/NCE值显著升高（t=3.914和7.312，P均 < 0.01）。以上结果提示KGF可减少辐射引起的染色体异常，且可能减轻辐射引起的骨髓抑制。

随着放射性核素工业应用及电离辐射医学应用的发展，辐射损伤的防治显得尤为重要。DNA损伤是电离辐射的最初效应，电离辐射通过能量沉积或激活氧自由基直接或间接导致DNA损伤^[4]。DNA损伤及修复的程度决定了放射性疾病的转归，因此，减轻辐射导致的DNA损伤或者促进DNA损伤的修复可有效防治放射性疾病的发生。

SCGE可在细胞水平上评价DNA损伤的程度，该技术不仅能从单细胞水平上检测DNA链的断裂程度，还可以根据DNA链断裂的量化指标，进一步分析辐照后不同时相点DNA的残余量，从而揭示了DNA的修复过程。Szerencsi等^[5]采用该技术比较了核磁共振与⁶⁰Co γ射线对人外周血白细胞DNA的损伤程度。本研究运用SCGE检测各组小鼠接受7.2 Gy全身照射后外周血淋巴细胞DNA的损伤程度，评价KGF对受照小鼠DNA损伤的保护作用。结果显示，7.2 Gy照射后小鼠DNA的损伤明显，但与照射对照组相比，照前给予2、4 mg/kg的KGF对辐射损伤小鼠均表现出明显的遗传保护作用，提示KGF可以显著促进DNA的损伤修复。

微核实验是一种常用的细胞遗传学方法，真核细胞经辐射作用后可产生微核。微核发生率可评价染色体损伤的程度，PCE/NCE值可反映受照后骨髓抑制程度。本研究运用此实验技术检测各组小鼠接受7.2 Gy全身照射后骨髓细胞的损伤程度。结果显示，7.2 Gy照射后小鼠外周血淋巴细胞的微核率明显增加，与照射对照组相比，KGF给药组均可明显降低细胞微核发生率，提高照射后PCE/NCE值，表明KGF可减轻辐射引起的染色体异常及骨髓抑制。

KGF最初在肺成纤维细胞的培养液中发现，由间质细胞产生，特异地作用于上皮细胞表面的成纤维细胞生长因子受体2b，参与细胞分化、增殖、DNA修复、清除活性氧等诸多生物学过程。近年来，由于对皮肤^[6]、肺^[7]、胃肠^[8]等器官的辐射保护作用以及免疫重建^[9]作用，KGF成为各国辐射损伤防护的研究热点，但其对于辐射损伤的遗传保护作用却鲜有研究。KGF可修复或减轻氧自由基介导肺组织上皮细胞的DNA损伤^[10]，推测其可提高DNA断裂链的修复。本研究结果表明，KGF具有显著的遗传保护作用，且能够减轻辐射引起的骨髓抑制，有望成为新型辐射损伤防治药物。